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基于 ITS2 序列 SNP 位点鉴定白及药材及其混伪品

发布者: 发布时间:2016-09-06 浏览次数:

兰科白及属Bletilla 植物在中国有 4 个种分布,分别为白及 B. striata Rchb. f. 、华白及 B. sinensis( Rolfe) Schltr、黄花白及 B. ochracea Schltr. 、小白及B. striata 作为止血中药白及的原植物来源,认为其块茎具有收敛止血、消肿生肌之功效,临床用于咳血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒、皮肤皲裂的治疗。但由于白及属植物的资源分布具有地域性和重叠性,在黄花白及资源丰富的贵州、四川、甘肃省区,亦将之作为白及药材的地区性替代品种。无论是白及还是黄花白及,野生资源均珍稀濒危,而栽培资源尚难以满足市场需求,药材价格逐年上涨。在中药材市场中,以同属植物如小白及B.formosana、华白及B.sinensis,甚至以同科植物独蒜兰( 又名独叶白芨)Pleione bulbocodioides(Franch.)Rolfe、苞舌兰Spathoglottis pubescens Lindl.、竹叶兰Arundina gra-minifolia(D. Don)Hochr.的块茎作为白及药材混淆出售的现象屡见不鲜。白及和黄花白及这2种植物在非花期的植株形态较难分辨,当将同属或兰科其他属植物的块茎经处理加工为饮片、粉末时,药材真伪的鉴别难度就更大了,有时具有丰富专业鉴定学知识者亦难以仅凭经验定夺之。目前,采用分子标记技术成功开展白及属植物鉴定研究的报道,可见于运用SCAR分子标记方法将黄花白及( 地区药用品种) 与白及( 正品)、小白及( 同属伪品)、云南独蒜兰( 同科伪品) 鉴定区别的研究6,而以白及,或以白及和黄花白及为正品药材对象,将之与其他混伪药材鉴定区别的报道尚未见到。

赵丹,周涛*,江维克,肖承鸿,康传志

1贵阳中医学院,贵州贵阳550002

摘要:为建立白及药材的分子标记鉴定方法,该文提取白及及其混伪品药材的基因组DNA,利用PCR技术扩增rDNA ITS2片段,片段经双向测序、排序、比对,构建邻接树,查找SNP位点。结果显示,ITS2序列不仅能够有效地区分白及与其混伪品,而且存在可用作白及、黄花白及与其混伪药材鉴别的SNP位点。针对标记白及药材的SNP位点设计引物,通过筛选引物和优化特异性扩增条件后,获取引物BJ59-412F,BJ59-412R,HHBJ-225R在同一扩增条件下,可有效扩增白及、黄花白及,其产物长度分别约为350,520 bp,而混伪品则无PCR条带产生。该文所述引物和建立的反应条件可成功将白及、黄花白及与其混伪品药材进行同步鉴定,操作快速、简捷,结果可靠,可作为白及药材的快速分子鉴定方法。

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