基因表达分析是了解植物功能基因的表达规律,解析植物复杂代谢网络并对其进行表达调控的重要手段之一。通过实时荧光定量PCR 获得目的基因的相对表达量是目前最为常用的基因表达检测方法。因此,从植物中筛选出在不同器官、不同发育时期表达基本恒定的管家基因作为研究的内参基因是获得准确基因表达分析结果的关键。肌动蛋白(Actin)基因是广泛存在于植物中的管家基因,其编码的肌动蛋白是细胞骨架中微丝的主要组分,参与细胞内许多重要的生理活动,如细胞形状的维持、胞质环流、细胞运动、细胞分裂、细胞分化、细胞内的物质运输、急性建成以及信号转导等,具有高度保守、表达量高且稳定的特点,常被用作基因表达分析的内参基因。
丁铃,李军,周涛*,郑 伟,龙登凯,江维克,肖承鸿
贵阳中医学院,贵州 贵阳550002
摘要:目的克隆太子参肌动蛋白(Actin)基因片段并进行序列分析。方法 利用植物 Actin 基因的保守序列设计简并引物,通过 RT-PCR 和抑制 PCR 扩增太子参 Actin 基因核心片段。利用半定量 RT-PCR 分析太子参 Actin 基因在不同种源、不同器官、不同生长发育时期的表达情况。结果 通过 RT-PCR 获得 3 条太子参 Actin 基因的核心片段,长度均为 760 bp,依次命名为 PhACT1、PhACT2、PhACT3。通过抑制 PCR 及序列拼接后 3 条核心片段依次延长至 1 008、1 008、975 bp,分别编码 336、336、325 个氨基酸残基。半定量 RT-PCR 分析表明 PhACT2 和 PhACT3 基因在不同种源、不同器官、不同生长发育时期的表达量基本恒定,PhACT1 基因存在一定的差异。结论 首次从太子参中克隆得到 3 条太子参 Actin 基因序列,并确定 PhACT2 基因适合作为太子参功能基因表达分析的内参基因。
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